HE染色（蘇木精-伊紅染色，Hematoxylin and Eosin Staining）是組織病理學中經(jīng)典、應用廣泛的常規(guī)染色方法，用于在光學顯微鏡下清晰顯示組織和細胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)，為疾病診斷、科研觀察及教學提供基礎依據(jù)。該技術通過兩種染料的協(xié)同作用，使細胞核與細胞質(zhì)呈現(xiàn)鮮明對比：蘇木精（Hematoxylin）為堿性染料，可將細胞核內(nèi)的酸性物質(zhì)（如DNA、RNA）染成藍紫色；伊紅（Eosin）為酸性染料，將細胞質(zhì)、膠原纖維等堿性成分染成粉紅色或紅色。

　　HE染色實驗流程主要包括：組織固定（常用10%中性福爾馬林）、脫水（梯度乙醇）、透明（二甲苯）、石蠟包埋、切片（厚度通常4–6μm）、貼片、脫蠟至水、染色、脫水透明及封片。其中染色步驟為核心：先用蘇木精染核，經(jīng)鹽酸酒精分色和弱堿性溶液返藍后，再用伊紅染細胞質(zhì)。整個過程需嚴格控制時間與試劑濃度，以確保染色均勻、對比清晰、結(jié)構(gòu)分明。

　　HE染色實驗的前準備：

　　1、組織固定

　　固定劑選擇：常用10%中性福爾馬林（甲醛溶液），需確保固定液新鮮且pH中性（7.2-7.4），避免酸性或堿性環(huán)境導致組織收縮或膨脹。

　　固定時間：根據(jù)組織類型調(diào)整固定時間（如軟組織24-48小時，硬組織如骨骼需延長至數(shù)天），固定不足會導致細胞結(jié)構(gòu)模糊，過度固定則可能使組織變脆。

　　固定容器：使用廣口瓶或?qū)Ｓ霉潭ê?，確保組織完q浸沒在固定液中，避免局部干燥。

　　2、切片質(zhì)量

　　石蠟包埋：組織脫水、透明和浸蠟需徹d，避免石蠟中殘留水分或二甲苯，導致切片易碎或脫片。

　　切片厚度：常規(guī)切片厚度為4-5μm，過厚會導致染色不均或細胞重疊，過薄則易破損。

　　切片展開：將切片輕輕平鋪在40-45℃溫水中，用鑷子輔助展開，避免皺褶或氣泡，隨后貼附于載玻片上。

　　3、試劑配制與保存

　　蘇木精溶液：需定期過濾去除沉淀，避免染色不均；新配制的蘇木精需氧化成熟（如加入鉀明礬后靜置數(shù)天）才能使用。

　　伊紅溶液：伊紅Y需用蒸餾水或乙醇配制，避免使用硬水（含鈣、鎂離子）導致沉淀；溶液需避光保存，防止褪色。

　　分化液（如1%鹽酸乙醇）：需現(xiàn)用現(xiàn)配，避免長時間放置導致分化能力下降。